前几期的流式染料图解中，我们知道了市面上常见的荧光染料种类，学习了流式仪器的光学组件及荧光通道光学信号的收集过程，以及如何选择流式染料，后台也有收到一些小伙伴的反馈，在流式染料选择过程中，在一个实验多色染色方案中选择了BV421同时还选择了BV650抗体，在上机时没有进行调补偿操作，分析结果就差强人意。
按照之前的图解，这两个流式抗体应该是用不同的滤光片去接收（如下图所示），应该是没有较多的串色，也就是上一期推送讲到的荧光溢漏（图解流式 | 第13期. 流式荧光染料选择全攻略（二）），但实际上，是需要调节补偿的，在上机调补偿过程中，能看到明显的荧光溢漏现象（在BV421与BV650组成的象限中有明显的靠近对角线的细胞群），这是为什么呢？
如果提及APC与APC-Cy7,PE与PE-Cy7，大家可能很快反应出来，APC-Cy7是耦联抗体，在APC的基础上，通过化学键结合上Cy7基团，同时使用APC与APC-Cy7则需要调节补偿，所以不难找到BV421与BV650之间的关系，BV650是耦联抗体，是在BV421的基础上加了一个X基团，其基本原理为：用405nm的激光器去激发BV650时候，首先是要激发BV421，产生420nm左右的发射光后，这个420nm的发射光再作为BV650的激发光去激发BV650，产生650nm左右的发射光。
也就是说，BV650会有一个与BV421完全一致的发射峰，这些激发光总有一部分无法被X基团接收，所以被误以为是BV421的发射光谱（如下图所示），需要将这一部分光进行调补偿，恢复真实情况。
以此类推，PE与PE-Cy7，是PE结合上Cy7基团，形成一个新的染料，先去激发PE的发射光后，再去激发Cy7，所以在PE-Cy7上会有一个与PE完全相同的峰型，虽然肉眼看起来两者的发射光谱差距很远。这并不是意味流式抗体选择失败，通常我们可以通过调补偿的方式去“纠正”，依旧能够进行分析，其实更多的是需要了解一些特殊的流式抗体命名与其实际激发和发射光的知识点（例如BV650等是BV421的耦联抗体，BB700等由专业流式抗体研究公司命名的抗体，BB700其实际激发和发射光与PerCP-Cy5.5类似），以免错过一些关键信息。学有余力的小伙伴可以进行总结，时间有限的同学，不妨把手头实验方案中的配色方案仔细了解，为后续的调节补偿等做好知识储备。
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